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ELISA避免“花板"出现的措施之阴阳性对照的选择
ELISA实验是一种灵敏度高,特异性强,重复性好的实验诊断方法,ELISA实验中有很多因素影响着实验结果,导致出现“花板"问题。为了避免“花板"问题的出现,降低检测的假阳性率,获得更理想的实验结果,BUNSEN九游服务技术小编建议:先我们在选择ELISA试剂时,应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、价格操作方便、省时的试剂。并在检验的过程中应采取下列措施:
(1)检测之前,加大离心转速,尽量延长时间,使血细胞和纤维蛋白充分沉淀,让血细胞与血清分离。
(2)抽取样本时应抽出足够检验量的血液标本,选择无添加剂的真空试管。
(3)血液标本应置于室温下1~2h,使血液凝固收缩,然后离心检测或让血液过夜后再检测。这样才能使得血液充分收缩,让标本中的非特异性物质所致的假阳性率降至低。
(4)加样时不能加入红细胞或纤维蛋白,要按照操作说明书去做,否则会影响实验结果。
(5)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板"的出现。
(6)手工洗板时应注意液体被溅出或孔与孔之间的液体溢出,连成整体液面后产生“花板"。
(7)洗液的温度也会影响洗板的干净程度,尤其是冬天温度过低时容易出现“花板"问题。
(8)用洗板机洗板时应防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板"的出现。
Elisa试剂盒之阴阳性对照的选择:
做ELSIA实验时,会遇到很多问题,ELISA实验中最常见问题的就是阴阳性对照应该如何选择。
1、如何选择合适的阳性对照?
阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致,一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,加入一定量的待检物质。比如,以人血清为标本的测定,阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。
2、如何选择合适的阴性对照?
阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致,先检测确定其中不含待检物质。比如,检测人血清标本时,阴性对照应该选择正常人血清。检测免疫动物血清中抗体效价时,阴性对照应该选择该动物的免疫前血清。
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