做ELISA实验，事先收集好的标本需如何处理?

　　做ELISA实验，在处理样本应该先了解收集样本的注意事项。

　　【标本收集注意事项】

　　1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

　　2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。

　　3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。

　　4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。

　　5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。

　　6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。

　　7.收集标本时，应该做好防护措施(比如戴手套，口罩，护目镜等)，认为所有标本都具有一定的潜在危险性。

　　8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。

　　样本正确的处理方法应该是这样的：

　　【标本处理办法】

　　1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存。

　　5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存。

　　注：样品稀释的一般原则

　　用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的检测范围。样品的稀释应有详细记录。

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