干货分享：细胞培养板的选择与常见问题解答

　　细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

　　(1)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择：

　　贴壁细胞一般用平底培养板。悬浮型细胞的培养一般用V型。U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

　　不同型状的板子自然有不同用途。平底的什么类型的细胞都可用，但当细胞数目较少，如做克隆时，就用96孔平底板，另外，做MTT等实验时，无论贴壁和悬浮细胞，一般均用平底板。

　　至于U或V型板，一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面，当做两种不同淋巴细胞混合培养时，需要二者相互接触以刺激，因此，一般需要U型板，因细胞会由于重力的作用而聚集在一个很小的范围内。

　　V型板的用途更少，一般用于细胞杀伤实验时，为了使效靶细胞紧密接触，常使用V型板，但这种试验也可用U型板替代(加入细胞后，低速离心)如果是养细胞的话，通常是选用平底的。

　　圆底的好像没听说过拿来养细胞。圆底的通常是拿来做分析， 化学反应， 或是保存样品用的， 因为圆底比较好将液体吸得干净，如果用平底的就不好吸了。

　　(2)细胞培养常见问题与解答

　　问：我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ，但不知道到底什么实验用哪种规格。

　　答：要根据你具体的实验要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，细胞爬片一般用24孔等，要具体根据你实验来定。

　　问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板多孔细胞培养板有什么区别?

　　答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。

　　区别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。

　　(3)细胞培养板的密闭和污染问题

　　细胞培养板的加样和操作：细胞培养板在进行细胞操作时同样遵循严格无菌的原则，各项操作要保证规范、科学，不对细胞的生长造成额外的影响。这其中最常见的问题就是如何保证加样后细胞的均匀和尽量减少换液对细胞生长状态的影响。

　　问：96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?

　　答：

　　1. 盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值)。

　　2. 凡事有利必有弊，这样当然增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的：

　　a 培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱);

　　b 培养箱内的湿度必须始终保持为100%(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。

　　就好像培养皿，也是一个盖倒扣的容器，也不会污染。主要是因为盖子“L"型边缘产生气流负压的缘故，灰尘上面才附着有微生物，而气流携带的灰尘是无法通过产生负压的盖边缘的。而透气作用只是通过空气的扩散，不会产生气流，所以只会透气不会透菌。

　　问：我使用24孔板，在其中的某些孔中有操作(在超净台内)，而其它孔中还有细胞要培养，我很担心这样会污染，不知道要注意什么?大家不知道有什么好的建议。

　　答：在超净台内如果操作规范的话应该可以的，我想你可以充分利用培养版的盖子，尽量只暴露要操作的孔，将其它孔用盖子盖起来。这是我的一点粗浅的见解，抛砖引玉吧!

　　(4)细胞分布不均及解决办法

　　问：我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊?我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题啊?

　　答：请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多!自己可是试试!

　　(5)6孔板接种和换液问题：

　　问：我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里(不管加药和对照)，总有两三个孔(随机)细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗?到底是啥原因呢?请各位指点

　　答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。

　　(6)24孔板接种问题：

　　问：把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞?我是选择孔内铺盖玻片，在玻片上种植。每次换液都用PBS洗，必要的步骤吗?另外，也有可能和细胞种类有关或者和培养液有关?

　　答：1. 我想你的培养液可能加的太少了。由于表面张力的作用，培养板的边缘液体会向上走，造成培养液面呈现一个凹面(就像量筒的液体凹面一样)，中央的细胞正好在凹面的处，培养液少，细胞的营养不够，甚至干涸掉，空气中的氧气也会造成损伤，即使有增值过来的细胞也会死掉。

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