什么是ELISA，ELISA目的及实验方法有哪些?

　　ELISA即酶联免疫吸附测定，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙x等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

　　ELISA应用的范围很广，而且正在不断地扩大，原则上ELISA可用于检测一切抗原、抗体及半抗原，可以直接定量测定体液中的可溶性抗原。

　　扩展资料 ：

　　ELISA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。

　　测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时常用半对数值，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是的检测区域。

　　ELISA也可应用于病毒抗体检测：流感病毒、腮腺炎病毒、麻诊、风疹、轮状病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒、EB病毒、腺病毒、肠道病毒、脑炎病毒、黄热病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等，其敏感性都超过目前常用的检测方法。此外，还可用于鉴定病毒型别，例如疱疹病毒。

　　ELISA目的是检测血清中特定的抗原，以达到定性判断的目的。

　　酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙x等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

　　ELISA分类方法：

　　1、夹心法

　　夹心法常用于检测大分子抗原。

　　2、间接法

　　间接法常用于检测抗体。

　　3、竞争法

　　竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原。

　　ELISA实验所有方法的缺点很明显：

　　1、重复性不好;

　　2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性;

　　3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

　　1、直接法(directELISA)

　　将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

　　优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。

　　缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。

　　2.间接法(indirectELISA)

　　此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

　　优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

　　缺陷：交互反响发作的机率较高。

　　3.双抗体夹心法(sandwichELISA)

　　被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。

　　优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。

　　缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。

　　4.竞争法(competitiveELISA)

　　样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。

　　优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。

　　缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。

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